FAQ

자주 묻는 질문

고객 문의가 많은 항목을 정리했습니다. 키랄칼럼에 대해 도움이 필요 할시에는, 꼭 봐주세요.

질문DAICEL 키랄 컬럼에서 기울기 용리(gradients mode)를 사용 할 수 있습니까?
답변

DAICEL 키랄 컬럼에서 기울기 용리를 사용하는 것이 효과적이지 않을 수 있습니다. 기울기용매 모드에서 분석 시간 단축되더라고 분석 종료 후 컬럼에서 초기 이동상 조건으로 평형화하는 시간이 더 걸릴 수 있기 때문입니다.
조건 검토시 키랄 컬럼도 기울기 용리 (gradient mode)효과가 있다는 보고도 있습니다. 기울기 용리 (gradient mode)를 걸어 키랄 컬럼에서 분석을 할 때, 농도 비율의 범위를 어느 정도 제한하고 설정하는 것이 좋습니다. 이렇게 함으로써 화합물이 머무름이 없거나 전혀 용출되지 않는 등의 문제를 피할 수 있을지도 모릅니다.


수용액 이동상의 조제법
"제 1 권장 이동상"
• 포름산 수용액 (pH 2)의 조정법
pH 2 때까지 순수에 편대를 추가합니다.


• 20 mM 탄산 수소 암모늄 수용액 (pH 9)의 조정법
1 L의 메스 플라스크에 탄산 수소 암모늄 (NH4HCO3 FW : 79.06)을 1.58 g을 정 가지고 순수를 목표 선까지 넣습니다 (20 mM). 탄산 수소 암모늄 수용액을 비커에 옮겨 바꾸고 pH 측정기를 사용하여 pH9 때까지 diethylamine을 추가합니다.
"제 2 권장 이동상"
인산 수용액 (pH2) 조제법
pH2 때까지 순수에 인산을 추가합니다.


• 20mM 붕산 완충액 (pH9) 조제법
1 L의 메스 플라스크에 붕산 1.24 g을 정 가지고 순수를 목표 선까지 넣습니다 (20 mM). (H3BO3 FW : 61.83). 네 붕산 나트륨 7.63 g을 두 번째 1L의 메스 플라스크에 정 가지고, 순수를 목표 선까지 넣어 용해시킵니다. 붕산 나트륨 완충액 500 ml를 1 L의 비이커에 옮겨 바꾸고 pH 측정기를 사용하여 pH 9 때까지 붕산 수용액을 넣고 있습니다.


• 10 mM 헥사 플루오르 인산 칼륨 완충액의 조정법
헥사 플루오르 인산 칼륨 (KPF6 FW : 184.07) 9.2 g을 500 ml 플라스크에 넣고, 표준선까지 증류수를 추가합니다 (100 mM). 헥사 플루오로 인산 칼륨 수용액을 1L 비이커에 옮겨 바꾸고 pH 측정기를 사용하여 pH 2 때까지 인산 수용액을 넣고 있습니다.


"CROWNPAK 이동상"
과염소산 용액 pH 1의 조제법
시판의 70 % 과염소산 용액 16.3g을 1L의 메스 플라스크에 정 가지고, 순수를 목표 선까지 추가 희석합니다.
다른 pH의 수용액은 다음과 같이 준비 할 수 있습니다.
1. pH 2.0 - 과염소산 용액 pH 1 100 ml를 1L까지 암 올라간다.
2. pH 1.5 - 과염소산 용액 pH 1 316 ml를 1L까지 암 올라간다.
3. pH 1.3 - 과염소산 용액 pH 1 500 ml를 1L까지 암 올라간다.
(기준량이므로 pH 미터로 pH를 확인하십시오.)


과염소산 이동상에 대한 중요한 안전을 위한 주의
과염소산 및 과염소산 이온은 매우 위험한 화합물입니다. 과염소산 및 과염소산 이온을 이동상에 사용하는 것은 분석의 목적으로만 제한하고 과염소산 완충액을 분취 목적에 사용하지 마십시오. 과염소산 (또는 과염소산 나트륨)를 포함한 수용액을 농축을 위해 가열하면 폭발 할 가능성이 있어 위험합니다. 처음 과염소산 완충액을 사용하시는 분은, 과염소산 및 과염소산 나트륨 MSDS를 읽어주세요.

질문가드가 필요합니까?
답변

분석 컬럼 및 세미 분취 컬럼을 사용시에는 가드를 사용하십시오.
충전제에 흡착하는 불순물이나 충전제를 용해시켜 버리는 용매에서 본체 컬럼을 보호하는 것을 목적으로 가드를 사용합니다. 본체 컬럼을 장기간 안정적으로 사용하기 위해 가드를 사용하시는 것을 권장합니다.


가드의 교환시기는 크로마토그램의 형상으로 판단하십시오.


[체크 포인트]
피크의 간격이 좁아짐
피크 모양이 나쁜 (피크 퍼짐, peak shoulder 등)
시스템 압력이 증가함


가드는 분석 컬럼 및 세미 분취 컬럼과 같은 충전제가 충전 된 가드 카트리지 또는 가드를 사용하십시오. 본체 컬럼과 다른 유형의 가드를 사용하면 이상 흡착 등에 의해 분리에 나쁜 영향을 미칠 수 있습니다.


가드 컬럼 엔드는 본체 컬럼과 같은 모양입니다. 가드와 본체 컬럼을 연결하기 위하여 짧은 연결을 준비하십시오. 3μm 시리즈, 용제 형 시리즈, H 시리즈, R / RH 시리즈의 가드는 카트리지 타입으로 되어 있습니다. 가드 카트리지의 사용은 가드 카트리지 홀더가 필요합니다. 각 품종별로 카트리지를 보유하고 있지만, 가드 카트리지 홀더는 단백질계 컬럼을 제외한 모든 가드 카트리지에서 공통적으로 사용하실 수 있습니다.

질문DAICEL 키랄 컬럼은 SFC에서 사용할 수 있습니까?
답변

DAICEL 키랄 컬럼은 SFC에서 사용하여 높은 성능을 보여줍니다. SFC는 이동상은 주로 이산화탄소가 사용되지만, Hexane과 유사한 특성이 있습니다. SFC에서는 사용할 수 일반적 HPLC 용 키랄 컬럼에서 사용할 수 있는 모든 용매 (알코올, 아세토니트릴)을 modifier로 사용할 수 있습니다. 일반적으로 키랄의 선택성은 SFC와 HPLC에서 동일하지만 이산화탄소의 확산 속도의 속도에서 SFC가 더 높은 유속에서의 분리 효율이 높고, 높은 분리도를 얻을 수 있습니다. 또한 HPLC에서 카르복시산을 분석하는 경우 이동상에 산성 첨가제의 첨가가 필요하지만, SFC에서는 첨가제를 추가하지 않아도 날카로운 피크를 얻을 수 있습니다.


컬럼에 걸리는 압력 및 컬럼 안정성이 중요하며, SFC 높은 압력이 컬럼에 나쁜 영향을 미치는 것이 아닌가하는 우려 될지도 모릅니다. 그러나 이산화탄소의 저점은 컬럼에 걸리는 압력은 HPLC보다 SFC가 훨씬 낮습니다. 그리고 다이셀의 컬럼은 SFC 조건에서 매우 안정적이다.


SFC 용 키랄 컬럼을 사용하지 않을 경우에는 SFC 장치에서 분리하여 컬럼 내에서 이산화탄소 2 - 프로판올 또는 에탄올로 대체하고 밀봉하여 보관하는 것이 좋습니다. HPLC에서 사용한 컬럼을 SFC로 사용하고자 할 때는 먼저 Hexane/ 2-프로판올을 흘려주도록 합니다. 그렇지 않을 경우 CO2는 충분히 Hexane을 흘려주지 못하게 되며 바탕선 잡음이 발생할 수 있습니다.


주의
SFC의 액화 탄산 가스를 탱크에서 공급하고 펌프 가압 압송하는 작업은 고압 가스 보안법의 "고압 가스의 제조"에 해당합니다. 따라서 SFC는 고압 가스 보안법의 적용을 받아 (분석 장비 수준이면 제 2 종 제조 설비에 해당), 컬럼은 법규에 규정 된 강도가 필요합니다. 우리는 고압 가스 보안법에 규정 된 SFC에 필요한 강도를 가진 SFC 용 키랄 컬럼을 준비하고 있습니다. SFC 용 키랄 컬럼은 "공 컬럼의 강도 계산서" "재료 증명서" "공 컬럼 도면" "내압 기밀 시험 결과"를 지정하고 있습니다.

질문키랄 컬럼를 사용할 때 주의 사항은 무엇입니까?
답변

키랄 컬럼을 사용할 때 반드시 점검 해야 될 사항

 

1. 컬럼 박스에 동봉 된 사용 설명서를 반드시 읽어주십시오.
immobilized type chiral column 과 coated type chiral column, 그리고 coated type chiral column에서도 품목마다 안정성에 큰 차이가 있습니다.
2. 컬럼을 설치하기 전에 HPLC 장비 전체 (샘플 루프, 오토 샘플러 (사용하는 경우), 검출기를 포함) 을 분석하고자 하는 용매로 대체합니다.
3. 컬럼을 가능한 한 길게 사용하기 위해 권장 용매만을 사용하십시오. 권장 용매 이외의 용매의 사용을 검토하는 경우에는 당사에 문의하십시오.
주의: 추천 용매 이외의 용매는 모든 혼합비의 안정성과 장기간 사용했을 때의 안정성을 평가하는 것은 아닙니다. 그런 용매를 지속적으로 사용하면 컬럼의 수명을 크게 단축 할 수 있습니다.
4. 간단한 조성의 이동상을 사용하십시오. 일반적으로 순상 조건 컬럼의 크로마토그래피 분리는 핵산 / 2 - 프로판올 (IPA) = 95 / 5 ~ 50 / 50 (v / v), 핵산 / 에탄올 = 95 / 5 ~ 50 / 50 (v / v ) 등의 간단한 조성의 이동상으로 달성됩니다.
주의: 구 타입의 다당유도체 컬럼에는 이동상 중의 알코올 농도에 제한이 있는 컬럼이 있을 수도 있습니다. (용매의 사용 제한은 각 컬럼에 첨부 된 설명서를 참조하십시오.)
분리 조건 검토는 HPLC-등급의 에탄올 사용을 권장합니다.
응용: HPLC 급 에탄올은 5 %의 2 - 프로판올 및 5 %의 메탄올의 첨가로 성격이 변화 할 수 있습니다. 그러나 절대로 벤젠 및 기타 비 알코올 변성제로 변성시킨 에탄올은 사용하지 마십시오.
5. 컬럼을 장착, 용매를 흘리기 시작하면 기본이 안정 될 때까지 시스템을 평형화하십시오. 일반적으로 평형화는 1ml/min의 유속으로 최소한 30 분 정도 걸립니다. 낮은 유속이거나 검출기의 감도가 높은 경우에는 평형 화에 시간이 더 걸릴 수 있습니다.
6. 불용해성 물질이 포함되지 않은 샘플을 입력하세요. 불용해성 물질이 컬럼 엔드를 막히게 하며 매우 많은 문제가 발생합니다. 불용해성 물에서 본체 컬럼을 지키기 위해 항상 가드 또는 인라인 필터 (2μm 이하)을 사용하는 것이 좋습니다.
7. 비키랄 불순물과 광학 이성질체를 구별하기 위해 다중 파장 검출기 (광학이성체의 피크는 모든 파장에서 같은 형상이 됩니다)를 사용하거나 UV 검출기와 선광 검출기 및 RI 검출기 등 다른 검출기를 병용하는 것이 좋습니다. 여러 비대칭 중심 (키랄 중심)이 있는 라 세미 화합물 인 경우 각 조합의 광학 이성질체가 모든 파장에서 같은 흡수 강도가 됩니다.
8. 컬럼에서 샘플 석출이 되는 문제는 방지하기 위해 이동상과 같은 용매에서 샘플을 용해시켜주세요. 이동상에 샘플이 녹지 않는 경우는 당사에 문의하십시오.
9. 분석이 완료되면 적절한 보관용 용매로 컬럼을 세척하십시오. 역상 조건 완충액을 이동상에 사용하는 경우에는 buffer을 포함하지 않는 같은 조성의 이동상으로 컬럼을 세정하고, 권장 보관 용 용매로 대체합니다. 또한 이동상 첨가제 (산이나 염기 등)를 사용한 경우에는 첨가제를 포함하지 않는 같은 조성의 이동상으로 컬럼을 세척하고 보관 용매로 대체합니다. 트리플루오로 아세트산 (TFA)과 diethyelamine (DEA) 등 산이나 염기를 이동상 첨가제로 사용하면 하룻밤이면 그대로 컬럼에 이동 상이 남아 있어도 문제가 되지 않습니다. 며칠 사용하지 않으면 컬럼이 피해를 받지 않도록 첨가제를 포함하지 않는 이동상에서 HPLC 장비 전체를 세척하는 것이 좋습니다. 컬럼을 장시간 사용하지 않을 경우 컬럼을 HPLC 장치에서 분리 컬럼에 이동상이 증발하는 것을 방지하기 위해 마개를 꼭 닫고 보관하십시오. 첨가제를 사용하지 않는 순상 조건에서 다당유도체 컬럼을 사용하는 경우 이동상을 흘리지 않고 1 주일 이상 HPLC 장치에 컬럼을 장착 한 상태로 두지 마십시오. 다당계 키랄 컬럼은 적절히 보관하면 장기간 사용하실 수 있지만, 적절하지 않은 조건에서 보관하면 단기간 동안 컬럼이 손상 될 수 있습니다.


다이셀의 키랄 컬럼를 사용시 주의해야 될 사항

 

1. 권장 최대 압력 한계 이상으로 컬럼을 사용하지 마십시오.
2. 컬럼의 취급 설명서에 기재되어 있지 않은 용매를 샘플 용해 액과 이동상에 사용하지 마십시오. 컬럼의 종류에 따라 사용할 수 용매 다릅니다. 가지고 있는 컬럼에서 좋은 성과를 낸 용매도 다른 컬럼에서는 사용하지 못할 수 있습니다.
3. 장기간 컬럼을 보관하려면, 완충액 및 첨가제를 컬럼 중에 남아 있지 않도록 세척하여 주십시오. 설명서에 기재되어있는 각 컬럼에 권장 보관 방법에 따르십시오.
4. 컬럼에 첨부되어 오는 설명서 및 성적서를 잘 보관하십시오. 설명서를 버리고 버리거나 잃어버린 경우에는 당사로 문의하시기 바랍니다. (문의 양식) 새것을 보내드립니다. 성적서에 기재된 크로마토그램은 분리에 문제가 생겼을 때, 새 컬럼의 경우에 비해 같은 분리 성능이 있는지를 비교하는 데 사용하실 수 있습니다.

질문스탠다드 타입의 컬럼과 H 시리즈의 컬럼과 3μm의 컬럼의 차이를 알려주세요.
답변

CHIRALCEL과 CHIRALPAK은 10μm의 입자를 사용하였으며, H 시리즈의 CHIRALCEL, CHIRALPAK 컬럼 (상품명에 H가 붙는 것)에는 직경 5μm 입자가 사용 되었습니다. 3μm 시리즈 CHIRALCEL, CHIRALPAK 컬럼 (상품명에 3이 붙는 것)에는 직경 3μm 입자가 사용되어 있습니다.


H 시리즈, 3μm 시리즈의 컬럼은 각각에 대응하는 종래 품 컬럼과 같은 키랄 고정상이 사용되어 있습니다. (예 : AD 컬럼과 AD-H 컬럼과 AD-3 같은 키랄 고정상이 사용되어 있습니다.) 충전제의 입자 크기가 작아지는 것으로, 스탠다드 타입의 컬럼과 동일한 선택을 가지면서, 더 높은 분리능을 발휘합니다. 따라서 H 시리즈의 컬럼이나 3μm 시리즈의 컬럼은 기존 제품 컬럼에서는 어려웠던 분리 및 불순물의 피크가 목적 성분의 피크에 겹쳐 버리는 분리에 더 효과적입니다. 분석의 속도를 중시하는 경우, 입자가 작은 컬럼, 컬럼 길이가 짧은 컬럼을 사용하는 것이 좋습니다. 역상용 컬럼 RH 시리즈는 직경 5μm 입자를 사용, 각 품종에 대하여 3μm 입자의 타입을 준비하고 있습니다.


immobilized type chiral column 관해서는 분석용 컬럼은 직경 5μm 입자 (CHIRALPAK IA / IB / IC / ID)와 3μm 입자 (CHIRALPAK IA-3, IB-3, IC-3)가 사용되고 있습니다.

질문분석 조건에서 세미 분취용 컬럼에서 분취 조건으로 스케일업(scale-up)을 어떻게 하면 좋을까요? 샘플 로딩양은 얼마나 되나요?
답변

분석 조건에서 세미 분취에서 분취 조건에 확장은 간단한 계산만으로 아주 쉽게 할 수 있습니다. 라세미체를 광학 분할 할 목적의 경우, 우선 분석 컬럼을 사용하여 최대 샘플 로딩양 조건을 결정하십시오. 분리 가능한 조건이 여러 개 일 경우, 각각의 조건에 부하 시험을 실시하여 가장 샘플 로딩량을 증가 할 수 있는 조건을 선택하십시오. 샘플 로딩양 시험을 실시 할 때는 먼저 목표를 세미체를 이동상과 같은 조성의 용매에 최대한 고농도가 되도록 용해시킵니다. 검출 파장은 목적물 피크가 검출 할 수 있는 값으로 설정, 라세믹체  분리능이 떨어지는 되는 정도로 주입량을 늘려 과부하가 되기 직전의 주입량을 확인합니다. 부하량의 실험 값 (WE)는 부하량의 실험 값 (WE) = 라세미 용액의 최대 농도 (Cmax) × 과부하가 되기 직전의 최대 주입량 (VAmax)라는 관계식에서 구할 수 있다. 대략적인 기준으로 분석 컬럼에서 일반적인 WE 값은 1 ~ 10mg/injection입니다.
0.46 × 25cm의 분석 컬럼의 상대적인 로딩량 (LCR)을 1로 가정하면 각 컬럼 크기의 LCR과 유속은 아래 표와 같이 됩니다.


" 샘플 로딩양은 얼마나 되나요?"라는 질문의 대답은 (WE) × (LCR)에 의해 구해집니다. 분석 컬럼의 로딩량이 일반적인 1 ~ 10mg이면 2 × 25cm의 세미 분 취용 컬럼의 로딩량은 일반적으로 19 ~ 190mg/injection됩니다.

 

컬럼 크기 (직경 × 길이)

충전재의 (g)

부하 용량 (상대적)

유속 (ml / min)

0.46 x 25 cm

2.50

1

1.0

1 x 25 cm

11.8

5

5.0

2 x 25 cm

47.4

19

19

5 x 50 cm

592

250

50

10 x 50 cm

2370

1000

200

"어떤 크기의 컬럼을 사용해야 합니까?"라는 질문이 자주 있습니다, 그것은 고객이 여러 번 주입 할 것인지를 결정합니다. 그것은 다음 식을 이용하여 산출 할 수 희망하는 컬럼 크기를 결정할 수 있습니다.


고객의 목적을 달성하기 위하여 필요한 컬럼의 LCR의 값은 얼마입니까?


예 : 라세미체에서 각 광학 활성 체 1g을 분리해야 합니다. 30 분 간격으로 샘플을 주입하고 24 시간 동안 48 번 주입하는 것이 타당하다고 판단했습니다. 분석 컬럼을 사용했을 때의 최대 로딩량은 2mg = 0.002g (각 광학 활성 체 1mg 씩)입니다. 48 번 주입으로 각 광학 활성 체 1g을 얻기 위해 요구되는 LCR 값은 얼마가 됩니까?


다음과 같이 계산됩니다.



표를 참조하면 이번 최적의 컬럼은 LCR = 19 2 × 25cm 컬럼 입니다.
"내가 가지고 있는 세미 분취용 컬럼은 얼마나 샘플 로딩할 수 있을까요?"라는 질문이 많습니다. 거기에는 먼저 분석 컬럼은 최대 샘플 로딩량을 알아보십시오. 세미 분 취용 컬럼의 부하량은 분석 컬럼의 최대 부하량에 세미 분 취용 컬럼의 LCR값을 곱함으로써 구할 수 있다. 즉, WPREP = WE × LCR입니다. 또한, 분석 컬럼의 주입량에 세미 분 취용 컬럼의 LCR 값을 곱하면 그 세미 분 취용 컬럼의 주입량이 구해집니다. 즉, VPREP = VAmax × LCR입니다.

질문컬럼에 압력이 많이 걸려 적절한 유속으로 사용할 수가 없습니다.
답변

키랄 컬럼 박스에 동봉된 사용 설명서에 기재된 제한 압력은 컬럼에 걸리는 압력을 말하며, 시스템 전체에 걸리는 압렵이 아닙니다. 예를 들어, 보통의 분석 상태에서 컬럼을 포함한 시스템 전체에 걸리는 압력이 10Mpa, 컬럼을 제거한 상태에서 시스템 전체에 걸리는 압력이 3MPa이면 컬럼 본체에 걸리는 압력은 7MPa입니다. 시스템 압력이 높아지는 원인은 시스템의 어딘가가 막혀있는 것으로 생각됩니다. 시스템 라인이나 인라인 필터 밸브 부분에 걸림이 있는지 여부를 확인하십시오.


 컬럼 자체에 압력이 높은 경우에는 컬럼 끝부분에 시료에 의해 막히는 일이 자주 있습니다. 그런 경우, 권장 절차대로 세척을 하여 입자를 제거 될 수 있습니다. 또한 컬럼 문제를 해결하기 위해 분석 컬럼 또는 분 취용 컬럼의 상류 측에 제거 교체가 가능한 인라인 필터 혹은 가드 카트리지를 항상 설치하는 것이 좋습니다.


 세미 분취 컬럼 사용시의 유속은 일반적으로 분석 컬럼 사용시의 유속에 컬럼 단면적 배 한 유속 합니다.  세미 분 취용 컬럼을 사용하여 높은 유속으로 운전하는 경우, 시스템의 라인의 내경과 검출기 셀의 양을 늘릴 필요가 있습니다. 또는 권장 최대 압력을 초과하지 않도록 유속을 낮게 설정 해야 합니다.


 순수한 에탄올과 프로판올 등 점도가 높은 용매를 이동상으로 사용하면 압력이 높게 걸릴 수 있습니다. 그런 경우, 권장 최대 압력을 초과하지 않도록 유속을 낮게 설정하십시오. 그런 용매를 이동상으로 사용한 후에도 점도가 낮은 용매를 이동상으로 사용할 때는 유속을 올려 작동 할 수 있습니다.


일반적으로 역상 조건에서 RH 시리즈의 컬럼을 사용하는 때에는 순상 조건으로 H 시리즈의 컬럼을 사용할 때보다 유속을 낮게 설정해야 합니다. RH 타입의 역상 컬럼은 점성이 높은 수계의 이동상을 사용하기 위해 압력이 높게 걸리기 쉽습니다.


 coated type chiral column 사용에 압력이 급격하게 상승하는 경우 심각한 문제가 발생할 가능성이 있습니다. 샘플 및 이동상에 충전제에 손상을 주는 물질이 소량 포함되어 있으면 컬럼이 급격하게 손상 될 수 있습니다. 이러한 상황이 발생하면, 이동상에 키랄 선택기 인 다당 유도체 폴리머 용해되어 유출되어 컬럼에 압력이 급격히 상승 할 수 있습니다.

질문샘플이 hexane, alcohol 에 용해되지 않습니다. 샘플 용매는 무엇을 사용하면 좋을까요?
답변

분석이 목적일 경우, 일반적으로 샘플 농도를 높게 할 필요는 없습니다. 일반적 이동상과 같은 조성의 용제에 1mg/ml 또는 그 이하의 샘플을 용해하면 됩니다. 샘플이 염기염이면 샘플 용매에 디에틸아민을 0.1 % 첨가하면 샘플이 평소보다 용해도가 높은 프리 염기가 이동상에 용해성을 개선 할 수 있습니다. 반대로, 샘플이 산성염이면 트리플루오로 초산을 0.1 % 첨가함으로써 이동상에 용해성을 개선 할 수 있습니다.


 immobilized type chiral column 을 사용하는 경우 샘플의 용해성이 높은 다른 이동상을 할 수 있습니다. 분석 목적의 경우 샘플의 주입량이 적기 때문에 샘플 용해 용매가 결과에 미치는 영향은 거의 없습니다. 특히 선택한 샘플 용해 용매 이동상과 동일한 정도의 용매 강도를 가진 경우입니다. 그러나 분취 목적의 경우에는 주입 샘플이 이동상과 섞인 때 샘플이 석출 될 수 있으므로 주의가 필요합니다. 이 경우 이동상의 용해도를 높이기 위해 샘플 용액에 사용하는 용매를 이동상에 섞어 사용하는 것이 좋습니다.


coated type chiral column을 사용하는 경우 샘플 용매로, 100 % 메탄올, 에탄올, 이소프로필 알코올, 아세토니트릴을 사용해봅세요. 이러한 극성 용매는 거의 모든 키랄 컬럼에서 사용할 수 있습니다. 일반적으로 톨루엔, 클로로포름, 메틸렌 클로라이드, tert-부틸 메틸 에테르, 테트라 히드로 푸란, 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 에틸 아세테이트, N, N-디메틸 포름 아미드, 디메틸 술폭 드, 피리딘 등의 용제를 coated type chiral column에 주입하는 샘플 용매로 사용하는 것은 삼가 해주십시오. 이러한 용매가 샘플에 소량 포함되어있는 경우, 키랄 선택기 인 다당 유도체 폴리머가 용출되어 컬럼수명이 크게 단축 될 수 있습니다.


 샘플이 수용성 용매에만 용해할 경우, IA / IB / IC / ID / AD-RH / AS-RH / AY-RH / OD-RH / OJ-RH / OZ-RH 컬럼을 역상 모드에서 사용 하십시오. 역상 모드에서는 이동상과 희석 용매에 메탄올 / 물, 에탄올 / 물, 이소 프로필 알콜 / 물, 아세토니트릴 / 물을 사용할 수 있습니다. 충전제 별 역상 이동상 조성의 제한 사항은 설명서를 참조하십시오. 키랄 고정상 담체 인 실리카겔이 용해하는 것을 피하기 위해 이동상의 pH는 2 ~ 9 사이에서 사용하고 특히 pH7 ~ 9에서는 가드 카트리지를 반드시 사용하십시오.

질문광학 이성질체를 분리 가지고 가고 샘플이 있는데, DAICEL에서는 어떤 서비스를 제공합니까
답변당사의 키랄 분리 서비스의 중요한 부분으로 수탁 분취 서비스를 제공하고 있습니다. 빠르게 고순도 광학 활성 체를 얻고 싶으나, 시간이 없거나 분석 조건을 확장하고 분리하기 위한 설비가 없는 경우에, 수탁 분리 서비스를 활용하십시오. 서비스를 의뢰의 경우 당사의 영업 담당자에게 문의하시기 바랍니다. ( 문의 양식 ) 검토 시작 있어서 필요가 있으시면 비밀 유지 계약을 체결 드립니다. 먼저 견적을 위한 샘플을 저희에게 알려주세요. 당사의 숙련된 직원이 다양한 키랄 컬럼를 이용해 최적의 컬럼 및 최적 분취 조건을 결정합니다. 분취 조건이 발견되면, 분취 서비스를 이용할 경우 견적을 제출하겠습니다. (자세한 내용은 분취 서비스 의뢰 페이지를 참조하십시오).
질문어떤 첨가제를 어떤 농도로 사용하면 피크 모양이 개선됩니까?
답변

많은 중성 또는 약산성, 약 염기성 샘플은 첨가제를 필요로 하지 않습니다. 따라서 대부분의 화합물 먼저 무첨가에서 분석 조건의 탐색 (컬럼 검사)를 실시하는 것이 좋습니다. 강산 또는 강염기 샘플은 다당 유도체 키랄 컬럼에 흡착하기 쉽고, 결과적으로 피크 퍼짐을 볼 수 있습니다. 이 흡착은 컬럼의 실리카 겔의 가장 활성 부위에서 발생합니다. 이 문제를 극복하기 위해 활성 부위에 선택적으로 흡착되는 화합물을 이동상에 추가합니다. 그럼으로써 활성 부위에는 샘플 대신 첨가 화합물 흡착하고 샘플이 흡착하지 않습니다. 가장 일반적인 첨가제는 산성 첨가제로는 트리 플루오로 아세트산, 염기성 첨가제로는 디에틸아민입니다. 이러한 첨가제는 비극성 용매에 잘 녹고 순상 모드 또는 극성 유기 용제 모드에서 자주 사용됩니다. 이러한 첨가제의 장점은 이동상 용해도가 낮은 샘플의 용해성을 크게 높일 수 있습니다.디에틸아민와 트리플루오로 아세트산과 같은 첨가제는 이동상에 0.5 %를 상한으로 추가 할 수 있습니다. 일반적인 첨가량은 0.1 %입니다.


 고객 중에는 처음부터 첨가제를 사용하여 분석 조건의 탐색을 생각하는 분도 계십니다. 일반적인 방법으로 디에틸아민와 트리플루오로 아세트산을 모두 이동상에 추가하는 방법도 있습니다. Screening시 첨가제를 사용하는 경우, 첨가제를 넣지 않아도 좋은 경우가 있기 때문에 분석 조건을 다른 컬럼에서 사용할 때 첨가제의 필요성을 신중하게 검토해야 합니다.

질문기존에 사용하던 컬럼이 분리가 잘 되지 않습니다. 어떻게 원래의 분리를 얻을 수 있습니까?
답변

컬럼의 능력은 많은 크로마토그래피 인자로 평가됩니다. 예를 들어, 컬럼 효율 (N), 선택성 (α), 분리도 (Rs), 피크 대칭성 (Ps), 압력변화 (ΔP) 등이 있습니다. 컬럼 성능이 변화하는 원인도 많은 것을 생각할 수 있습니다. 그 중 일부는 키랄 컬럼뿐만 아니라 실리카겔 컬럼 등에서도 일어나는 것도 있지만, coated type chiral column에만 특이적으로 발생하는 경우도 있습니다.


일반적으로 컬럼 문제가 발생한 것으로 의심되는 경우는 취급 설명서를 보시고 기재된 방법으로 컬럼을 충분히 세척하십시오. 그런 다음 컬럼 박스에 동봉된 성적서를 보시고 같은 조건에서 컬럼을 검사하십시오. 이 검사 결과가 문제의 원인 발견에 중요합니다.
immobilized type chiral column (CHIRALPAK IA / IB / IC / ID)를 사용하는 경우 문제 해결은 간단하여 먼저 설명합니다.

 

압력작용


immobilized type chiral column 에서는 압력 상승의 주요 원인은 컬럼 엔드에 있습니다. 샘플 또는 이동상 중의 불용해성으로 인한 압력 상승을 야기하고 있습니다. 또한 이동상보다 용해성이 좋은 용매에 용해 된 샘플을 주입해도 막힘 발생할 수 있습니다. 즉, 용해도가 낮은 이동상과 혼합하여 샘플이 석출되어 컬럼 엔드쪽이 막혀 버리는 현상입니다. 이 문제의 해결책은 컬럼 인렛 프릿(inlet frit) 세척하거나 교체하는 것입니다. 그러나 컬럼 인렛 프릿(inlet frit) 을 교체하는 것이 쉽지 않고, 컬럼 충전 층에 악영향을 미칠 위험이 있으므로 권장하지 않습니다.  간단한 방법으로 컬럼 흐름 방향과는 반대로 세척 (역세척)하는 방법이 있습니다. 물론이 같은 문제를 미연에 방지에도 가드 카트리지를 사용하며 가드 카트리지를 정기적으로 교체 할 것을 권장합니다.


coated type chiral column에서 일어나는 급격한 압력 상승은 고정상에 대한 용매의 영향이 있을 수 있습니다. 만약 압력 상승의 원인이 고정상에 손상 금지 용매를 사용하여 발생한 것이라면, 복구하는 것은 어렵습니다. 이것을 피하기 위해서는 컬럼을 연결하기 전에 HPLC 장치 전체에 사용 금지 용매를 이동상으로 흘려주어 치환합니다. 분석물 또한 이동상에 용해하여 분석하는 것이 가장 좋습니다. 소량의 금지 용매가 섞여 있어도 큰 문제가 아니라고 생각 될지도 모르지만 사용 금지 용매가 키랄 폴리머를 용해시켜 컬럼 성능의 급격한 저하의 원인이 됩니다.  컬럼 효율성과 선택성의 현저한 저하가 크로마토그램에서 거의 확실하게 볼 수 있을 것이다. 이러한 경우, 에탄올 및 2 - 프로판올을 장시간 흘려주어 다소 개선 할 수도 있지만, 대부분의 경우 컬럼이 완전히 파괴되어 있기 때문에 컬럼 교환이 필요합니다.

 

컬럼 효율


많은 경우 컬럼 효율의 변화는 피크 대칭성, 피크 모양의 변화를 수반합니다. 드물게 peak tailig, shoulder가 발생하여 컬럼 효율이 떨어지는 것은 컬럼 헤드에 공극이 형성되는 것이 원인이라고 생각됩니다. 이 공극은 이동상 조건 (일반적으로 역상 조건)에 의한 실리카 담체의 용해, 컬럼 내압 이상의 가압 실리카겔 입자의 파괴 또는 컬럼 초기 충전 문제로 인한 것이 원인입니다. 구입시에는 컬럼에 동봉되어 있는 성적서에 기재되어있는 조건에서 컬럼을 검사 해 주시고, 사용 개시 후에도 정기적으로 같은 조건에서 검사를 받는 것으로, 컬럼의 성능에 변화가 없다 확인 할 수 있습니다. 컬럼 효율 손실의 대부분은 컬럼 엔드 부분(보통 역상 조건에서 발생) 또는 컬럼 헤드에 물질의 흡착이 발생할 수 있습니다.


컬럼 헤드에 물질의 흡착은 샘플의 화학적 순도가 낮은 경우, 또는 고정상에 강하게 흡착하는 성분이 샘플에 포함되어있는 경우에 볼 수 있습니다. Immobilized type Chiral column 을 사용하는 경우, DMF 등의 용해성이 강한 용매로 세척하여 해결할 수 있습니다. 이 방법은 coated type chiral column에는 사용할 수 없습니다. coated type chiral column의 경우 사용 가능한 용매 속에서 용출 힘이 강한  2 - 프로판올로 세척합니다. 권장 세척 조건에서 성능이 복구되지 않을 경우에는 보다 강력한 세척이 필요하지만, 이 경우 컬럼이 손상 될 수 커집니다. 이 방법 또한 정보가 필요한 경우 당사로 문의하시기 바랍니다. ( 문의 양식 ) 그러나 이 방법은 반드시 성공하는 것은 아닙니다. 따라서 가능한 한 Immobilized type Chiral column 컬럼을 사용하실 것을 권장합니다.


때때로, 새 컬럼을 사용하면 설정 한 분리 조건에서 분리가 재현되지 않을 수 있습니다. 이 현상은 로트 간의 차이에 의한 가능성도 있습니다. 새 컬럼과 지금까지 사용하고 있던 컬럼의 이동상 기록이 원인 인 것이 많습니다. 즉, 이전 컬럼은 지금까지의 기록 속에서 이동상에 사용 된 유기 용제가 극미량이라도 흡착 잔류하고 그것이 "메모리 효과"로 분리에 매우 큰 영향을 주고 있을 가능성이 있습니다. immobilized type chiral column 의 경우 컬럼에 DMF를 흘려주어 "재설정"을 실시하는 것만으로 메모리를 제거 할 수 있습니다. 많은 경우, 적절한 용매를 포함 이동상을 새 컬럼을 몇 시간을 흘려주어 문제를 해결할 수 있습니다. 그래도 분리가 복원되지 않으면 다른 이동상, 컬럼 온도에서 분리 조건을 재검토 할 필요가 있을지도 모릅니다.  새로운 분리 검토에 들어갈 때 새 컬럼 또는 사용 이동상과 샘플 사용한 컬럼을 사용하시는 것이 좋습니다.  컬럼의 분리 이상에 관한 질문이 있으시면 문의하시기 바랍니다. ( 문의 양식 ) 귀하의 질문에 지체 없이 정확하게 응답하고자 하오니 가능한 컬럼에 발생한 문제를 기술하여 알려주십시오.

질문역상 조건에서 분석하고 싶습니다. 어떤 컬럼과 이동상을 사용할 수 있습니까?
답변

키랄 컬럼 이름에 R이 붙는 컬럼과 immobilized type chiral column 을 역상 조건에서 사용하실 수 있습니다. 이동상의 유기 용매 성분으로 THF, 아세톤, 디옥산 등을 사용할 수 Immobilized type Chiral column 입니다. 알콜 (메탄올, 에탄올, 2 - 프로판올)와 아세토니트릴은 모든 컬럼에서 사용 할 수 있습니다. 일반적인 역상 컬럼에서 사용 된 수용액과 pH 및 이온 강도가 같은 수용액 경우 컬럼은 안정하고 사용할 수 있습니다.


immobilized type chiral column, coated type chiral column 모두 pH = 2 ~ pH = 9 범위에서 안정적으로 사용할 수 있습니다. pH = 2 기 수용액과 pH = 9, 20mM 탄산 수소 암모늄 수용액 (디에틸아민에서 pH를 조정)가 각각 산성, 염기성 샘플에 대한 첫번째 권장 이동상 용매입니다. 위 조건에 만족 한 분리를 얻을 수 없는 경우, pH = 2 인산 수용액과 pH = 9, 20mM 붕산 완충액을 각각 산성, 염기성 샘플에 사용하십시오. 그러나 이러한 용매는 초기 검토 권장 사항이라는 점에 유의하십시오. 더 낮은 농도의 완충액 또는 pH = 2에서 pH = 9 사이에서 가장 좋은 분리를 얻을 수 많습니다. 또한 셀룰로오스 계의 컬럼은 염기성 샘플에 이온형 크로마토그래피 거동을 이용한 0.1M 헥사 플루오르 인산 칼륨 수용액에서 좋은 분리를 얻을 수 있습니다.

 


1. 표준 이동상과 용매 비율

샘플의 성상

산성 화합물

수용액

포르산 수용액 (pH2.0)

유기 용매

아세토 니트릴, 메탄올, 에탄올, 2 - 프로판올

표준 이동상 조성

수용액 / 유기 용매  2

※ 2 수용액 / 유기 용매 = 90 / 10 ~ 1 / 100의 범위에서 사용이 가능하지만, 수용액 / 아세토니트릴 = 60 / 40에서 검토를 시작하는 것이 좋습니다.

2. 기타 이동상 (1 이동상에 충분한 분리를 얻을 수 없는 경우에 사용하십시오.)

샘플의 성상

산성 화합물

염기성 화합물

아밀로스 계열 
CHIRALPAK AD-RH/AD-3R, AS-RH/AS-3R, 
AY-RH/AY-3R

50 ~ 100mM 인산 완충액 (pH2.0)

20mM 붕산 완충액 pH9.0

인산 수용액 (pH2.0)

-

셀룰로오스 계열 
CHIRALCEL OD-RH/OD-3R, OJ-RH/OJ-3R, 
OZ-RH/OZ-3R

50 ~ 100mM 인산 완충액 (pH2.0)

100mM KPF 6 (또는 NaPF 6 ) 수용액

인산 수용액 (pH2.0)

인산 pH2.0 조정  
100mM KPF 6 (NaPF 6 )
수용액

인산 pH2.0 조정  
100mM KPF 6 (NaPF 6 )
수용액

-

immobilized type chiral column 위의 조건으로도 사용하실 있습니다.

질문키랄 컬럼에는 어떤 용매를 사용할 수 있습니까?
답변

키랄 컬럼 사용 전에 컬럼과 함께 제공되는 설명서를 반드시 확인하시기 바랍니다. immobilized type chiral column (CHIRALPAK IA / IB / IC / ID)는 어떤 용매도 사용할 수 있지만, coated type chiral column에서 사용 가능한 용매가 제한되어 있습니다. 그러나 다음의 간단한 예방 조치를 취해 주시는 것만으로, 컬럼 장기간 안정되게 사용할 수 있습니다. 설명서에는 사용 가능한 용매가 포함되어 있습니다. 설명서의 첫머리에 쓰는 사용 금지 용매에 관한 주의 사항을 꼼꼼히 확인하시기 바랍니다. 또한 혼합 용매로 허용 범위에 있는 용매도 정리되어 있습니다. 3 종류의 용매의 혼합은 다당 고분자의 용해도가 알려져 있지 않고, 폴리머의 용해도가 높아질 가능성도 있습니다

 

immobilized type chiral column 과는 크게 달리 기존의 coated type chiral column에서는 디클로로 메탄, 클로로포름, THF, DMSO와 같은 용매는 절대 사용하지 마십시오. 이와 같은 용매를 사용하면 컬럼 헤드에서 다당 고분자가 용해, 용매가 희석 된 때 폴리머가 다시 침전하여 컬럼이 막혀 버립니다. 샘플 용해 용매로 사용 된, 또는 시스템 라인(오토 샘플러 라인 포함)에 남아 있던 사용 금지 용매가 소량 혼입하여 컬럼의 성능을 저하 시키거나 컬럼을 파괴하는 원인이 됩니다. 샘플 중에 미량 사용 금지 용매가 남아있는 경우에도 컬럼 수명을 단축시킬 수 있습니다. 이러한 이유에서도 immobilized type chiral column, CHIRALPAK IA / IB / IC / ID의 사용을 추천합니다. 특정 용매를 고객님의 보유 컬럼에서 사용할 수 있는지 모르는 경우 사용하기 전에 문의하시기 바랍니다. ( 문의 양식 )

질문광학 분할하고자 샘플이 있는데, 어떤 컬럼을 사용하면 좋을까요?
답변

당사는 키랄 컬럼 검사 서비스를 실시하고 있습니다. 고객의 샘플에 가장 적합하다고 생각되는 키랄 컬럼 (immobilized type chiral column 과 coated type chiral column모두 포함)를 사용하여 초기 심사를 실시합니다.

 

당사에서는 키랄 컬럼 서비스를 실시하고 있습니다. 고객님의 샘플에 가장 적합한 키랄 컬럼을 추천해드리고 있습니다. 키랄 센터가 2개 이상 포함된 화합물의 경우 많은 검토가 필요하며 스크리닝 및 최적화에 소요되는 시간등을 고려해야 합니다. 분리 대상 화합물의 구조를 보내주시면 문헌 검색 및 기술 지원을 해 드립니다. (문의 양식) 구조 공개가 어려운 경우 유사한 구조를 가진 일반적인 화합물 이름 또는 특정 유도체 화합물 이름을 보내주시면 구조 검색을 할 수 있습니다.  Daicel사의 키랄 컬럼을 사용하여 화합물의 분리 데이터가 이미 많은 문헌에 보고 되어 있습니다. 이 검색을 바탕으로 고객의 화합물에 가장 적합한 컬럼을 추천해드립니다. 키랄 컬럼 선택을 위한 어플리케이션 가이드에는 700개 이상의 일반적인 라세믹 화합물의 분리 데이터가 게재되어 있습니다.

질문Immobilized type Chiral column을 사용하여 분석 방법을 개발하는 경우, 어떻게 진행하면 될까요?
답변

immobilized type chiral column 은 coated type chiral column보다 용매 선택의 폭이 넓어집니다.


샘플 구조에 대한 정보만으로 키랄컬럼의 선택성을 예측하기 어려우므로 컬럼 스크리닝을 통해 결정합니다. 다양한 용매 조합을 통해 초기 분석 스크리닝의 시간을 단축하기 위한 4가지의 용매 조합을 확인했습니다.


아래의 표는 분리 성공률이 주요 이동상 조성입니다. 이러한 이동상 중 한 가지를 선택하여 스크리닝을 진행합니다. 그 결과에 따라 적절한 머무름 시간을 조정하기 위해서 이동상 용매 세기를 조절합니다. 예를 들어 peak가 너무 빨리 검출되는 경우 용매 세기가 약한 Hexane의 비율을 높여 줍니다.  CH2Cl2 등의 할로겐 계 용매 등은 immobilized type chiral column 에서만 사용할 수 있습니다.

 

우선 추천 
심사 용매

alkan  1 / 
2 -
프로판올

alkan  1 / 
에탄올

alkan  1 / MTBE  2 / 
에탄올

alkan  1 / 
CH2Cl2 
3 (/ 에탄올)

일반적인 초기 조건 
(v / v / v)

80:20

80:20

0:98:2

50:50

권장 조성 범위 
(v / v / v)

99:1 ~ 50:50

99:1 ~ 50:50

90:10:0 (0:100:0) ~ 
0:60:40 (0:60:40)

85:15 ~ 0:100

 

 

둘째 추천 
screening 용매

alkan  1 / 
THF

alkan  1 / 
초산 에틸  4

alkan  1 / 
CHCl 
3

아세토 니트릴
알코올류  5

메탄올
기타 알코올류

일반적인 초기 조건 
(v / v / v)

70:30

50:50

70:30

100:0

100:0

권장 조성 범위 
(v / v / v)

95:5 ~ 0:100

80:20 ~ 0:100

85:15 ~ 0:100

80:20 ~ 0:100

100:0 ~ 0:100

※ 1 : n-Hexane, iso-Hexane, n-헵탄. 샘플에서는 alkan의 종류에 따라 다소 분리가 다를 수 있습니다.
※ 2 : 용매 세기가 약한 MTBE를 이동상으로 사용한 경우 에탄올을 첨가하여 peak 모양 조절을 잘 분리하여 얻을 수 있습니다. 반대로 극단적으로 머무름이 약한 화합물의 경우 alkan과 MTBE 혼합 용매를 사용하여 분석할 수 있습니다.
※ 3 클로로포름, 디클로로 메탄 등 비교적 용출 힘이 약한 이동상을 사용하는 경우, 알코올 (에탄올, 메탄올, 2 - 프로판올)을 1 ~ 5 % 정도 첨가하여 보존 힘과 피크 모양을 조절함으로써 더 좋은 분리를 얻을 수 있습니다. 샘플의 머무름이 너무 강한 경우에는 디클로로 메탄에 20 %의 에탄올을 첨가하는 것이 효과적입니다.
※ 4: 머무름이 강한 화합물의 경우, 알코올 (에탄올, 메탄올, 2 - 프로판올) 또는 THF을 초산 에틸에 첨가하여 용출 시간을 단축 할 수 있습니다.
※ 5: 메탄올, 에탄올, 2 - 프로판올 또는 THF.
※ 6: 이동상 선택 (특히 아세톤, 에틸 아세테이트, 톨루엔, 고농도의 클로로포름 등)와 샘플의 구조에 따라 UV 검출기에 의한 검출이 어려울 수 있습니다. 그 경우, RI 검출기 나 증발 광산란 검출기 (ELSD) 등 UV 흡수에 좌우되지 않는 검출기를 사용하십시오.

질문CHIRALPAK IA / IB / IC / ID로 사용하는 유기 용매 및 첨가제에 차이가 있습니까?
답변

CHIRALPAK IA / IB / IC / ID에도 coated type chiral column와 같이 첨가를 사용할 수 있습니다. 염기성 샘플을 분석할 때 diethylamine(DEA), 산성 샘플을 분석할 때 triflouro acetic acid(TFA)를 사용합니다. CHIRALPAK IB에서 염기성 샘플을 분석하는 경우 첨가제로 DEA를 사용하는 것보다 ethanol amine (EtNA),n-butylamine 특히ethylene diamine(EDA)을 사용하는 것이 선택성 및 피크 모양이 좋아지는 경우가 많은 것으로 알고 있습니다.


일반적으로 사용되는 방법으로 아민 작용기를 가진 샘플의 경우 염기성 첨가제를 추가하는 방법이 있습니다.

질문CHIRALPAK IA / IB / IC / ID 컬럼을 사용하는 장점은 무엇입니까? coated type chiral column과 immobilized type chiral column 중을 무엇을 선택해야 합니까?
답변

새롭게 분석법을 개발할 시에 immobilized type chiral column 사용을 추천드립니다. immobilized type chiral column 은 coated type chiral column 보다 높은 안정성을 보장합니다. 또한 immobilized type chiral column은THF, etylactate, 염소계 용제등 강력한 용매에 대해서도 안정적으로 사용할 수 있는 장점이 있습니다. 이러한 용매를 사용할시 기존에 사용한 이동상 조건과 비교하여 다른 선택성을 나타내어 분리 가능성이 높아집니다. 분취 크로마토그래피 용도에서도 이러한 용매를 사용하면 샘플의 용해성을 높이고 효율적으로 분취하여 생산성을 높일 수 있습니다.


 기존의 coated type chiral column으로 기시법등이 지정되어 있어 immobilized type chiral column 으로 승인이 나지 않은 경우에 coated type chiral column이 적합하겠습니다. 또한 immobilized type chiral column 에서 다양한 용매를 이용하여 분석 조건을 변경하였으나 충분한 분리를 얻을 수 없는 경우에 coated type chiral column을 사용하십시오.

질문CHIRALPAK IA / IB / IC / ID 컬럼을 사용할 때, 이동상 이외의 용매에서 샘플을 용해하여도 좋습니까?
답변

일반적으로 샘플을 이동상에 용해 시키는 것이 가장 최적입니다. 주입 샘플링을 할 때 이동상보다 센 용매를 사용하실 경우 주의하십시오. 피크 모양이 변형 되거나 검출되거나 분석결과에 영향을 미칠 수 있습니다.


분취용 크로마토그래피에서 잘 녹는 용매에서 녹인 후 고농도의 샘플이 상대적으로 이동상에 잘 녹지 않는다면 석출되는 위험이 있습니다. 만약 컬럼과 샘플의 흡착이 이동상 용출 힘보다 크게 되면 새로운 문제가 발생합니다. 이러한 경우 샘플이 CSP에 흡착하여 컬럼에 잔존하여 선택성 및 향후 분취 효율에 영향을 미칩니다.


종종 샘플 용해 용매에 dimethylsulfoxide(DMSO)가 사용되는 경우가 있습니다. 이 용매는 immobilized type chiral column 성능에 영향을 미치지는 않지만, 이동상 조성에 따라 컬럼에 DMSO가 흡착할 수 있습니다. DMSO로 희석한 샘플을 반복 주입한 경우에 CHIRALPAK IA에서 효율의 감소가 서서히 발생하지만, DMF 가끔 세척함으로써 성능을 복원할 수 있습니다. CHIRALPAK IB는 DMSO에 희석한 시료의 주입은 권장하고 있지 않습니다. CHIRALPAK IB에서는 DMSO가 흡착되어 효율이 현저히 저하 될 것입니다. CHIRALPAK IB에 흡착된 DMSO를 제거하고자 할 때는 컬럼을 역으로 장착하여 흘려주시면 됩니다. 이러한 조건하에서도 immobilized type chiral column 은 안정적으로 사용할 수 있습니다.

질문CHIRALPAK IA / IB / IC / ID에 어떤 용매를 사용할 수 있습니까? 사용할 수 없는 용매가 있습니까?
답변

현재 CHIRALPAK IA/IB/IC/ID에 컬럼 수명에 영향을 미치는 유기 용매는 알려져 있지 않습니다 hexane or heptane/alcohols, methanol, isopropanol,ethanol, acetonitrile, dichloromethane, chloroform, tetrahydrofuran,ethyl acetate, acetone, methyl acetate, MTBE, dimethylformamide,dimethylacetamide 등 많은 유기 용매를 사용할 수 있습니다.


용출되지 않고 컬럼에 잔존해 있는 화합물 및 불순물은 dimethylformamide, THF, or ethyl acetate와 같은 용매를 흘려주어 세척할 수 있습니다. 역상 조건에서 분석하는 경우, 컬럼은 pH = 2.0 ~ pH = 9.0의 범위에서 사용하십시오. 그러나 pH ≧ 7.0에서 분석하는 경우, 가드 카트리지를 이용하여 분석 온도는 25 ℃ 이하에서 사용하십시오. 또한 pH ≧ 7.0 적어도 200회 주입 후 가드 카트리지를 교체하십시오.

질문CHIRALPAK IA / IB / IC / ID는 각각 어떤 차이가 있을까요?
답변일반적으로 CHIRALPAK IA / IB / IC / ID의 분리 적용은 상호 보완적이며 서로 다른 키랄 화합물 군을 분리 할 수 있습니다 (물론, 1 개의 컬럼뿐만 아니라 여러 컬럼에서 분리할 수 있습니다). 또한, 일반적으로 AD-H로 분리하는 화합물 같은 이동상에서 IA도 분리를 얻을 경향이 있습니다. 마찬가지로 OD-H로 분리하는 화합물 같은 이동상에서 IB도 분리를 얻을 경향이 있습니다. 두 경우 모두, 필요에 따라 용매의 극성을 약간 변경하여 유지 시간을 조정하십시오. CHIRALPAK IC, ID는 위의 2 개의 컬럼과 분리 가능한 화합물이 겹치는 경우도 있습니다 만, 특징적인 선택성을 나타내는 컬럼입니다. 4 개의 컬럼을 함께 이용해 기존에 사용하는 이동상 (Hexane / 알코올) 이외에 더 폭 넓은 이동상을 사용하여 매우 많은 광학 이성체 분리가 가능합니다.