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Semi-prep 분취용 Column의 조건 설정 방법
Chromatography 방법에 의한 Chiral 물질 취득의 가장 큰 특징은 그 사용의 용이성에 있습니다. Daicel의 Semi-prep 분취용 Column은 분석용 Column과 같은 CSP를 사용하고 있기 때문에, 분석용 Column에서 분리 조건을 설정 할 수 있으면 그대로 분취 크기까지 확장 할 수 있습니다.
Semi-prep 분취용 Column에서 분취 절차
1. 분리 조건의 검토
- · 분석 Column (4.6 × 250mm)을 이용하여 화합물의 광학 분할에 최적화된 Column을 선정합니다.
조건 설정시의 포인트
| 이동상에 대한 샘플의 용해성 | 분리도 | Retention time |
|---|---|---|
| 효율적인 분취를 위해서는 이동상에 대한 화합물의 용해도가 중요합니다. Column에 사용할 수 있는 용매중, 화합물의 용해도가 높고 잘 분로도가 좋은 용매를 이동상으로 선정 해주십시오. | 이동상 조성 • 유속 • 온도 등의 조건의 최적화 | 샘플의 분취 시간을 단축하기 위해 10분 이내에 용출되는 것이 좋습니다. |
2. Loading capacity의 검토
- · 이동상과 같은 조성의 용매에, 화합물을 최대한 용해시킵니다.
- · Loading capacity 측정을 위하여 Sampling 합니다.
- · Base-line 분리가 가능한 최대의 Loading capacity 값을 측정합니다.
- 샘플 용해 액은 이동상과 같은 조성을 사용 하여야 함
· 샘플 용해 액이 이동상과 다를 경우, 분취시 Column 내에서 샘플이 석출 되거나, peak 왜곡 현상이 나타날 수 있습니다.
3. 안정성 시험
- · Loading capacity 검토에서 분리 된 샘플을 농축한 후, 일정시간 경과 후에 이를 다시 분석하여, 샘플이 안정한지를 확인 합니다.
4. Scale-up 계산
Semi-prep 분취용 Column은 1번 injection 시, 분석 Column (4.6 × 250mm)의 단면적 비례하여 분취 효율이 증가 합니다.
10 × 250mm의 경우 분석 Column의 4.7 배
20 × 250mm의 경우 분석 Column의 18.9 배
효율적 분취를 위한 포인트
효율적인 분취를 위해서는, 이동상에 대한 샘플의 용해성이 매우 중요합니다. Immobilized type Chiral Column 인 CHIRALPAK IA / IB / IC / ID/ IE/ IF는 다양한 유기 용매를 이동상으로 사용할 수 있기 때문에, 분취 효율성을 생각하여 우선적으로 검토 하여 주시기 바랍니다.
