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[사용 설명서]CHIRALPAK® AY-RH, CHIRALCEL® OX-RH and
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INSTRUCTION MANUAL FOR
CHIRALPAK® AY-RH, CHIRALCEL® OX-RH and
CHIRALCEL® OZ-RH
<Reversed Phase>
컬럼 사용 전에 반드시 사용 설명서를 읽어 주시기 바랍니다.
Column Description
칼럼은 포장 전에 선 테스트 후 출고됩니다. 칼럼 lot number, 테스트 인자 및 결과는 동봉된 성적서에 기재되어 있습니다.
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본 사용설명서는 다른 DAICEL Column에 적용할 수 없습니다. 주의 컬럼을 연결하기 전에 HPLC 시스템(Injector, injection loop)는 반드시 storage solvent로 흘려주신 다음 컬럼을 연결해 주시기 바랍니다. HPLC 용매로 많이 사용되는 acetone, chloroform, DMF, dimethylsulfoxide, ethyl acetate, methylene chloride, THF이 소량이 남아 있을시 충진제를 손상시킬 수 있습니다. 오토 샘플러를 사용하실 경우 분석하시고자 하는 이동상으로 흘려준 뒤 사용합니다. |
Operating Conditions
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2.1 x 150 mm Analytical columns |
4.6 x 150 mm Analytical columns | |
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Flow rate direction |
As indicated on the column label | |
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Typical Flow rate |
~ 0.1 to 0.3ml/min |
0.5 - 1 ml/min |
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Pressure limitation |
Should be maintained < 300 Bar (4350 psi) for maximum column life Adapt flow rates to column size. | |
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pH ① |
Between pH 2.0 and pH 9.0 | |
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Temperature ② |
5 to 40°C | |
① 컬럼 수명 연장을 위하여 완충용액의 pH는 8이 넘지 않도록 제조하시기를 추천 드립니다.
② pH가 7이상일 경우 컬럼 온도는 반드시 5°C ~ 25°C 사이가 되도록 합니다.
Operating Procedure
A - Mobile Phases / For UV and Mass Detections
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ACIDIC (AMPHOTERIC) Compounds |
NEUTRAL Compounds
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BASIC Compounds ④ | |
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CHIRALPAK® AY-RH CHIRALCEL® OX-RH CHIRALCEL® OZ-RH |
Aqueous solution ① |
HCOOH aq. pH 2.0 |
Water |
20mM NH4HCO3 aq. pH 9.0 adjusted with a basic additive | |
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Organic modifier② |
CH3CN or MeOH or EtOH or IPA or THF | ||||
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Typical starting conditions ③ |
Aqueous solutions 60% CH3CN 40%⑤ | ||||
NOTE 1: 충분히 분리되지 않을 경우 하기의 다른 종류의 수용액을 사용해보십시오
B – Complementary Aqueous and Buffer Solutions / For UV Detection
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ACIDIC (AMPHOTERIC) Compounds |
NEUTRAL Compounds
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BASIC Compounds ④ | |
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CHIRALPAK® AD-RH CHIRALPAK® AS-RH CHIRALCEL® OD-RH CHIRALCEL® OJ-RH |
Aqueous solution ① |
50mM Phosphate Buffer pH 2.0 OR H3PO4 aq. pH 2.0 OR 100mM KPF6 (or NaPF6) aq. pH 2.0 adjusted with H3PO4 |
Water |
20mM Borate Buffer pH 9.0 OR 20mM Phosphate Buffer pH 8.0⑥ OR 100mM KPF6 (or NaPF6) aq. | |
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Organic modifier ② |
CH3CN or MeOH or EtOH or IPA | |||
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Typical starting conditions ③ |
Aqueous solutions 60% CH3CN 40%⑤ | |||
NOTE 2: 완충용액의 농도는 500mM보다 작아야 합니다.
① Section C는 수용액 제조 방법 및 염기성 첨가에 선택에 대해 참조 할 수 있습니다.
② 분석법 개발시 우선적으로 아세토니트릴 사용을 추천드립니다.
・일반적으로 유기 용매의 용출력은 Acetonitrile, 2-Propanol, Ethanol, Methanol 순입니다.
CH3CN > EtOH > MeOH: 50%CH3CN ≈ 65-70%EtOH ≈ 75-80%MeOH
・유기 용매로써 알코올을 사용한 경우, Acetonitrile에 비해 배압이 높아지므로 주의하여 주십시오.
・칼럼 성능을 열화시킬 우려가 있으므로 표기 이외의 유기 용매를 사용하지 마십시오.
③ ・이동상은 사용하기 전에 0.5㎛ 정도의 다공질 멤브레인 필터로 여과하여 주십시오.
・이동상은 수용액과 Acetonitrile의 혼합액(조성비는 수용액/Acetonitrile=60/40(v/v)부터 검토를 시작할 것을 권장 합니다. 머무름 시간을 조절하고자 할 경우는 이동상의 조성비를 조정하여 주십시오
・칼럼의 온도를 내리면 유지시간이 길어져 분리계수가 향상되는 경우가 있습니다.
・칼럼의 온도를 올려 유속을 내리면 분리도가 향상되는 경우가 있습니다.
④ 염기성 화합물 분석시 컬럼 수명을 최대화 하기 위해서 반드시 가드 카트리지를 사용하실 것을 추천드립니다.
・실리카겔의 열화를 피하기 위해 강염기성수용액(>pH 9.0)은 사용하지 마십시오.
・pH 7.0 이상에서 사용할 때는 칼럼 온도는 25℃ 이하로 하여 주십시오.
・염기성이 매우 강한 시료는 실리카겔을 열화시킬 우려가 있습니다.
⑤유기 용매는 아래 표의 범위에서 사용할 수 있는데, 이동상의 유기 용매조성비가 높아지면 염분이 적출되어 칼럼의 막힘의 원인이 됩니다.
⑥ phosphate buffer의 경우 pH 8 이상으로 제조하여 사용하지 마십시오. pH 9가 필요한 조건이라면 ammonium bicarbonate 수용액 혹은 borate buffer를 사용하는 것이 컬럼 수명을 최대화하는 방법입니다.
C – Buffer Preparation – Examples
pH 2 KPF6 (NaPF6) solution 의 제조방법
A액: 100mM potassium (sodium) hexafluorophosphate
9.20g KPF6 / FW 184.06 or 8.40g NaPF6 / FW 167.95을 물 (HPLC 급)용해시켜 500mL 수용액이 되도록 한다.
B액: phosphoric acid (H3PO4 85% by weight)
⇒ A액에 B액을 첨가하여 pH 2.0으로 조정한다.
50㎜ Phosphate Buffer(pH 2.0)의 제조방법
A액: 50㎜ 인산2수소칼륨 수용액
3.40g KH2PO4 / FW 136.09을 물(HPLC급)에 용해시켜 500ml의 수용액으로 한다.
B액: H3PO4 (85wt%의 H3PO4)
⇒ A액에 B액을 첨가하여 pH 2.0으로 조정한다.
20mM NH4HCO3 수용액(pH 9.0)의 제조
A액: 20mM NH4HCO3 수용액
0.79g NH4HCO3 / FW 79.06을 물(HPLC급)에 용해시켜 500ml의 수용액으로 한다.
⇒A액에 Diethylamine을 첨가하여 pH 9.0으로 조정한다.
pH 2 KPF6 (NaPF6) solution
A액: 100mM potassium (sodium) hexafluorophosphate 수용액
⇒9.20g KPF6 / FW184.07을 물(HPLC급)에 용해시켜 500ml의 수용액으로 한다.
B액: H3PO4 (85wt%의 H3PO4 )
⇒A액에 B액을 첨가하여 pH 2.0으로 조정한다.
20mM Phosphate Buffer(pH 8.0)의 제조방법
A액: 20mM Phosphate Buffer
1.24g H3BO3 / FW 61.83을 물(HPLC급)에 용해시켜 1L의 수용액으로 한다.
B액: 20mM Na2B4O7 수용액
3.81g Na2B4O7 10H2O / FW 381.37을 물(HPLC급)에 용해시켜 500ml의 수용액으로 한다.
⇒B액에 A액을 첨가하여 pH 8.0으로 조정한다.
Column Care / Maintenance
▣ Column life 극대화를 위해 가드 카트리지 사용을 꼭 해 주세요
▣ 샘플은반드시이동상에녹인후0.5μm membrane filter를 사용하여 여과하여 주입하시기 바랍니다.
▣ 컬럼을 시스템에서 분리하기 전에 이동상으로 사용한 버퍼를 제거하여 컬럼 내에 완충염이 남아 있지 않도록 합니다. ( buffer/CH3CN 60:40 (v/v) 사용 후 Water/CH3CN 60:40 (v/v) 세척)
▣용출되지 않는 화합물이 있을 경우 컬럼 내에 완충염을 제거한 후 100% ACN으로 0.3ml/min으로 2시간 동안 흘려 줍니다. 만약 메탄올에 용해도가 더 높을 경우 메탄올을 사용하여 세척 단계에 사용하시면 됩니다.
▣100% CH3CN 혹 100% methanol 로 변경하기 전에 시스템 및 컬럼내에 완충염이 남아 있지 않도록 완전히 제거합니다.
▣컬럼 보관용매는 Water/CH3CN 60:40 (v/v) 입니다.
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