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[사용메뉴얼]CROWNPAK CR(+)/CR(-)
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CRWONPAK® CR(+)/(-) 사용 설명서
칼럼 사용 전에 반드시 사용 설명서를 읽어 주시기 바랍니다.
WARNING: CRWONPAK CR(+) 는 세심한 주의가 요구됩니다. 이동상 용매 구성비, 흐름속도등과 같은 특정 범위 내에서만 사용해야 합니다. 사용 범위 밖의 조건으로 분석하게 될 시 컬럼의 성능이 저하되거나 망가지게 됩니다. 특히 아래의 사용 설명서에 상세 기술될 내용이지만 유기용매비율의 범위를 벗어나게 될 시 컬럼의 압력이 많이 걸리거나 용량인자가 낮아지게 됩니다. 컬럼을 기기내에 장착하기 전에 시스템 라인을 모두 물로 세척한 다음 장착하도록 합니다. 사용 설명서를 숙지하시면 컬럼의 성능 잘 유지하여 사용하실 수 있습니다.
1. INTRODUCTION
CROWNPAK CR(+)는 키랄 선택제 (chira selector)로 crown ether가 실리카겔에 코팅되어 있는 컬럼입니다. 키랄 인지는 crown ether와 샘플의 암모니움 이온이 착물을 형성하는 원리가 분리가 됩니다. 이 컬럼은 오직 아미노산 및 1차 아민 작용기를 포함하는 샘플(산성을 띠는 이동상 조건에서 암모니움 이온이 형성되는)만 분리가 가능합니다. 이는 키랄 인지 메커니즘때문이며, 이 컬럼에서 분리가 가능한지 여부를 미리 예측할 수 있습니다. 아미노산의 광학이성질체 분리는 아래의 표에 나타나 있습니다. CRWONPAK® CR(+)에서는 D-form 먼저 용출됨을 알 수 있습니다. CRWONPAK® CR(-)는 CR(+) 와 반대되는 용출순서를 갖습니다.
2. SPECIFICATION
² Column Size : 150 mm L X 4 mm I.D.
² Quality of the column : SUS 316
² Particle Size of the Packing Material : 5 mm
² Liquid filled in the Column : Distilled Water
3. MOBILE PHASE
이 컬럼은 반드시 산성 조건의 이동상 조건하에서 사용되어야 하며, pH 1-9까지 사용범위를 갖습니다. 일반적으로 사용되는 pH 범위는 1~2입니다. 낮은 pH 에서는 높은 분리능을 나타내지만 컬럼 수명이 짧아질 수 있습니다. 따라서 컬럼 수명을 연장하기 위해서는 적절한 불리능을 확인할 수 있는 높은 pH 를 선택해야 될 수도 있습니다. (컬럼 오븐의 온도는 낮추는 것은 선택성을 높일 수 있는 한가지 방법입니다.)
Nitric acid, Trifluoroacetic acid와 같은 다양한 산을 사용할 수 있습니다. 그러나 perchloric acid를 추천드립니다. 이는 향상된 분리능 및 낮은 UV 파장에서도 분석물을 검출할 수 있기 때문입니다. 이러한 용매는 헬륨 퍼지와 같이 용매 내에 잔존해 있는 산소를 제거하는 탈기(degassing)가 중요합니다.
용량인자 (capacity)는 샘플의 소수성 정도에 따라 달라지게 됩니다. 소수성 화합물은 컬럼내에 머무름이 크고 친수성 화합물은 상대적으로 머무름이 짧습니다. 샘플이 머무름이 짧거나 낮은 분리도는 나타낼 경우, 이는 친수성을 띠는 성질 때문이며 이동상의 pH를 감소시켜 분석하도록 합니다. 또한 온도 낮추는 것도 효과적입니다.
소수성 화합물의 머무름이 짧을 경우 이동상내에 메탄올 함량을 증가하는 것도 효과적인 방법입니다. 그러나 이동상 전체 메탄올의 함량이 15%를 넘지 않도록 주의 합니다. 다른 유기용매는 추천드리지 않습니다. 또한 컬럼은 K+이온에 의해 손상될 수 있으므로 주의해야 합니다. 이동상내에 K+이온이 존재하지 않도록 반드시 주의하여 사용합니다.
* Example of mobile phase preparation.
16.3 g의 70% perchloric acic를 1리터가 되도록 물로 희석하여 제조합니다. (pH 1 )
² 100 ml of pH 1 perchloric acid is diluted to 1 litter. (pH 2 )
² 316 ml of pH 1 perchloric acid is diluted to 1 litter. (pH 1.5 )
² 500 ml of pH 1 perchloric acid is diluted to 1 litter. (pH 1.3 )
4. OPERATING TEMPERATURE
컬럼 가용 온도는 -5~50°C 입니다. 일반적으로 낮은 온도는 분리능을 향상시킬 수 있습니다. 특히 친수성 샘플의 경우 온도를 낮추어 이성질체 선택성을 높일 수 있습니다. 그러나 친수성 샘플은 낮은 온도에서는 컬럼내에 머무름이 길어지는 경우가 발생할 수 있습니다.
5. FLOW DIRECTION
컬럼에 명시된 방향으로 기기에 장착하여 주십시오.
6.FLOW RATE AND COLUMN PRESSURE
이동상에 따른 점도 차이에 의해서 컬럼의 압력이 달라지므로 그에 따른 적절한 흐름 속도를 설정해야 합니다. 예를 들어pH 2 perchloric acid 이동상으로 0 °C 로 분석하게 되면 압력은 대략 100 kg/cm2이며, 25 °C에서는 50 kg/cm2입니다. 컬럼 수명 연장을 위해서는 압력이 150 kg/cm2 가 되도록 흐름속도를 조절하여 사용하시기 바랍니다.
7. SAMPLE PREPARATION
샘플은 반드시 이동상에 용해하여 사용하시기 바랍니다. 샘플 용매에 메탄올 함량이 15%이상되지 않도록 주의하여 사용하시기 바랍니다. 또한 너무 많은 양의 샘플은 컬럼 효율성을 떨어지게 하는 요인입니다.
10-8 to 10-7 mol 정도로 검출기에 검출될 정도의 양이면 충분합니다.
8. DETECTION
다양한 검출기를 사용할 수 있습니다. Perchloric acid 를 사용할 때 검출 파장을 200nm로 설정할 수 있습니다. 모든 아미노산은 200nm 에서 높은 신호감도를 나타냅니다.
9. STORAGE
짧은 시간(며칠정도) 보관할 경우 분석중인 이동상으로 보관할 수 있습니다. 그러나 컬럼 및 LC line을 증류수로 채워놓는 것이 가장 좋습니다. 장기 보관일 경우 증류수로 채운 다음 컬럼의 인렛, 아울렛 피팅을 잘 확인한 다음 냉장고에 보관하여 미생물이 증식하는 것을 방지하도록 합니다.
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